
空氣中懸浮微生物的測定(dìng)有多種,但其測定的基本過程都是經過捕集-培養(yǎng)-計數的過程。目前普遍采用的是浮(fú)遊菌和沉降菌的測試方法。浮遊菌測試方法是通過收集懸浮在空氣中的(de)生物粒子於專門的培養基平皿,經若幹時間在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行(háng)計數,以此來判定潔淨環境內單位(wèi)體積(jī)空氣中的活微生物數。沉降菌測試方法是通過自然沉降原理收集(jí)在空氣中的生物粒子(zǐ)於培養基平皿,經若幹時間,在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數,以平板培養皿中(zhōng)的菌落數(shù)來判定潔淨環境內的活微(wēi)生物數。
1、檢測要求
(1)檢測前,被測潔淨室的運行狀態(tài)必須在正常狀態,其溫度(dù)、濕度、風量、風壓及風速必須(xū)在控製的規定值內;被測試的潔淨室(區)應已進行過(guò)消毒;同時,潔淨室的測試狀態必須符合生產工藝的要(yào)求,並在測試報告中(zhōng)注明其測試狀態。
(2)測試人員必須穿戴潔淨服,而且(qiě)一般不得超過兩個人。
(3)淨化空調係統正常運轉時間,對單向(xiàng)流如5級(100級)潔淨室或層流工作台不得少於10min;對非單向流如7級(10000級)、 8級(100000級)的潔淨室不(bú)得少於30min。
(4)采樣點的布置及要求:
a.浮遊菌測試時,采樣點位置可以與懸浮粒子測試點(diǎn)相同。工作區測(cè)點位置距地麵(miàn)0.8~1.5m(略高於(yú)工(gōng)作麵);送風口測點位置距送風麵30cm左右。根據需要可在關鍵(jiàn)設備或關(guān)鍵工作活動範圍處增加測點。采樣點的布置應力求均勻,避免局部區域(yù)過於集中(zhōng)或稀疏(shū)。
b.沉降菌測試時,采樣點(diǎn)的位置可以與懸浮粒子測試點(diǎn)相(xiàng)同。工(gōng)作區采樣點的位置距地麵0.8~1.5m(略高於工作麵);根據(jù)需要可在關鍵設備或關鍵工(gōng)作活動範(fàn)圍處增加測點,采樣點的布置應力求均勻。
2、檢(jiǎn)測(cè)方法
(1)浮遊菌的檢測方法
1)首先應對測試(shì)儀器、培養皿表麵進行(háng)嚴格消毒。采樣器進(jìn)入被測房(fáng)間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,用於100級潔淨室的采樣器宜一直放在被測房(fáng)間內;用消毒劑擦淨(jìng)培養皿的外表麵,把采樣器的頂蓋(gài)、轉盤以及罩子內外消毒(dú)幹(gàn)淨;采樣口及采(cǎi)樣管在使(shǐ)用前必須高溫滅(miè)菌。
2)采樣者應穿(chuān)戴與被測潔淨室(shì)相應的潔淨服,在轉盤上(shàng)放(fàng)入(rù)或調換培養皿前,雙手要用消毒劑消毒。
3)開(kāi)動真空泵(bèng)抽氣,使儀器中的殘餘(yú)消毒劑蒸發, 時間不少於5min,並調好流量、轉盤轉速。
4)關閉真空泵,放入培養(yǎng)皿(mǐn),蓋好蓋子後調節采樣器。
5)置采樣口於采樣點後,依次開啟采樣器、真空泵(bèng),轉動定時器(qì),根據(jù)采樣量選定(dìng)采樣時間(jiān)。
6)全部采樣結(jié)束後,將培養皿倒置於30~35℃恒溫培養箱中培養,時間不(bú)少於45h。
7)用肉眼直接計數(shù),然後用5~10倍放大鏡(jìng)檢查,是否有遺漏。若平板上(shàng)有(yǒu)兩個或兩個以上的菌落重(chóng)疊,分辨時仍以兩個或兩個以上菌落計數。
(2)沉降菌檢測方法
1)首先也(yě)是對測(cè)試(shì)儀器、培養皿表麵進行嚴格消(xiāo)毒滅菌,在37℃恒溫培養箱中培養48h觀察(chá),確信無菌後方可使用。
2)一般用Ø90mm的沉降平皿,注(zhù)人(rén)20mL培(péi)養基,放(fàng)在測點處,開(kāi)蓋暴露(lù)30min,將培養皿蓋蓋上後倒置。然後在30~35℃恒溫培養箱中經48h培養為肉眼計菌落數,並記錄生成的菌落數CFU,然後用5~10 倍放大鏡檢(jiǎn)查,是(shì)否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有兩個或兩個以上的菌落重疊,分辨(biàn)時仍以兩(liǎng)個或兩個以上菌落計數。
3、檢測儀器
(1)浮遊菌測試儀器
1)儀器設備主要有(yǒu)采樣器(qì)、真空抽氣(qì)泵、培養皿、恒溫培養箱等。
2)微生(shēng)物采樣器有多種形式,主要有固體撞擊(jī)式采(cǎi)樣器、離心式空氣微生物采樣器、氣旋式微生物氣溶(róng)膠采樣(yàng)器、液體衝(chōng)擊式微生(shēng)物氣溶膠(jiāo)采樣器、過濾式微生物氣溶膠采樣器、大容量靜電沉降采樣(yàng)器等。采樣器的選擇應考(kǎo)慮采樣器的靈敏度、采樣效率,以及有利於微生物的存活、易於分(fèn)析粒(lì)子大小、 易於操作和使用(yòng)方便等因素。浮遊菌采樣器一般采用狹縫式(shì)采樣器和離心式采樣器(qì)。
3)狹縫式采(cǎi)樣器(撞擊式采(cǎi)樣器(qì))。各類狹縫式采樣器工作原理都相同。將采集的微生物氣溶膠噴射到緩慢旋轉的撞擊板或固體(tǐ)培(péi)養基表麵(miàn)上,具有足夠大運(yùn)量的粒子撞(zhuàng)擊到收集板上(shàng),而較小(xiǎo)粒子由於慣性小在氣流(liú)夾攜下流出。每種型號的撞擊式采樣器都有其自身的收集效率。例如國產的THK-201型采樣器,屬於固體慣性撞擊式,打開電源後用真空抽氣,懸浮於空氣中的帶菌粒(lì)子被吸入采樣頭的篩孔篩,該采樣器的特點是采樣頭篩孔隙是可調的,當空隙調小時,可用於采集(jí)較小粒子;若要采集大粒子(zǐ)時,可將空(kōng)隙調大(dà),從而增大了采樣器的應用範圍。
4)離心式采樣(yàng)器基於離心撞擊原理,當采樣器通電後,借助於(yú)蝸殼內(nèi)的(de)葉輪高速旋轉,能(néng)把至少(shǎo)40cm距離以內(nèi)被測的帶菌空氣吸入,在離心(xīn)力的作用下(xià),空氣中的活微生物(wù)粒子加速撞擊到(dào)的培養基條上,采樣後的培養基條從蝸殼中(zhōng)取出,經過恒溫(wēn)、定時培養,形成菌落,然(rán)後進行菌(jun1)落計數。國內研製生產的JWC-1型采(cǎi)樣器便是一(yī)種性能較好的(de)離心式(shì)空氣微生物采樣器,采樣量為40L/min。
(2)沉降菌測試所(suǒ)用的儀器設備
主要有高(gāo)壓消毒鍋、恒溫培養箱、培養皿。培養皿一般采用Ø90mm*15mm的硼(péng)矽酸玻璃培養(yǎng)皿,培養(yǎng)基采用普通肉瓊(qióng)脂培養基或《中華人(rén)民共和國藥典》認可的其他(tā)培養基。
4、合(hé)格標準
國內外有關浮遊菌測定的標準:
國內外(wài)有關沉降菌測定的標準: