無菌室浮遊菌測（cè）試標準

1、目的
建立無菌室浮遊菌測試標準操作（zuò）程序，規範無菌室浮遊菌的檢測。
2、範圍
適用於無菌室（包括（kuò）潔淨工作台）浮遊菌的測試和環境驗證。
3、職責
QA、QC人員遵照執行。
4、內容
4.1參考標準：GB/T 16293-2010
4.2測試方法
本測試方法為計數濃度法，即通過收集懸浮在空（kōng）氣中的生物性粒子於專門的培養基（選擇能（néng）證實其能夠支持（chí）微（wēi）生物生長的培養基），經若幹時間（jiān）和（hé）適宜的生（shēng）長條件讓其（qí）繁殖到可見（jiàn）的菌落計數，以判定該無菌室的微生物濃度（dù）。
4.3測試儀器、輔助（zhù）設備和培養基
浮遊菌采（cǎi）樣器、培養皿（mǐn）（選用與儀器相適應的培養皿）、培養基、恒溫培養箱（xiāng）、高壓蒸汽滅菌器。
4.4測試狀（zhuàng）態及測試時間
4.4.1靜態（tài）和動態兩種狀態均可（kě）進行測試，靜態（tài）測試（shì）時（shí），室內測試人員不得多於2人。
4.4.2在靜態a測試時，單向流無菌室（區），測試在淨化空調係統正常運行（háng）時間不（bú）少於10分鍾後開始；非單向流（liú）無菌室（區），測試在淨化空調係統正常運行不少於30分鍾後開始。在靜態b測試（shì）時，單向流（liú）無菌室（區），測試在生產操作人員撤離現場並經過10分鍾自淨後開始；非單向流無菌室（區），測試（shì）在生產操作人員撤離現場並經過20分鍾自淨後開始。
4.5采樣點的確定
4.5.1zui少采樣點數（shù）目見表1，每次zui小采（cǎi）樣量見表2。
表1 zui少采樣點數（shù）目：

表2 zui小采（cǎi）樣量（liàng）：

4.5.2采樣（yàng）點位置布（bù）置宜力求均勻，避免采樣點在局部區域過於稀疏，采（cǎi）樣點按照《潔淨區環境監控管理規程》附件×××車間潔淨度監測采樣點（diǎn）布局圖的（de）要求布（bù）置，每個采樣點一般（bān）采樣一（yī）次。
4.5.3工作區采（cǎi）樣（yàng）點位（wèi）置離地0.8m~1.5m左右（略（luè）高於工作麵），送風口測點位置離開送風麵30cm左右，可在（zài）關鍵設備（bèi）或關鍵工（gōng）作活動範圍處增加測點。
4.6測試準備
4.6.1采（cǎi）樣器在進入被測區域前（qián）先清潔表麵，然後用75%酒精消毒（dú）一遍或存（cún）放於被測區域內，與被測試區域一起消（xiāo）毒（用於*無菌室的采樣器必須預先放（fàng）在被測房間內）。
4.6.2A/B級區采用一（yī）次性培養皿，其它區域按無菌操作要求，在中檢室潔淨工作台（tái）上提前製備培養備用（將滅菌後的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培（péi）養皿（mǐn）每個傾注約20ml培養基，Φ150mm培每個傾注約30ml培養基），培養皿加蓋後在室溫下放至凝固。自製好（hǎo）的培養皿在無菌室（shì）內存放不超過48小（xiǎo）時，2~8℃保存的培養皿一般不超過1周，一次性培（péi）養皿在標（biāo）注的有（yǒu）效（xiào）期內使用，過期不得使用。
4.6.3A/B級區使用的培養皿在區域消毒前一次性傳入，隨環境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內使用。若需臨時傳（chuán）入，則必須在前一天臭（chòu）氧消毒前通過C級與B級（jí）傳遞窗傳入B級區進行臭氧消毒，第二（èr）天使用。傳（chuán）入前（qián）表麵也必須用75%酒精擦拭。其它區域用培養（yǎng）皿按物品（pǐn）傳入要求當天傳入使用。
4.6.4采樣前，先用75%酒精清（qīng）洗采樣器（qì）的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。
4.6.5測試具體操作見浮遊（yóu）菌采樣器標準操作程序（xù）或浮遊空氣塵菌采樣器標準（zhǔn）操作程序。
4.6.6采樣結束後，蓋上培養皿蓋子，在培養皿上標注所有信（xìn）息（包（bāo）括產品批號，放置位置等），將培養皿用適宜的方式（shì）捆（kǔn）紮，倒置於30~35℃恒溫培養箱中培養，培養（yǎng）時間不少於（yú）2天。
4.6.7培養結束（shù）後逐個檢查培養皿，用肉眼對（duì）培養皿上所有的菌落直接計數、標記（jì），然（rán）後用5~10倍（bèi）放大（dà）鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上的菌（jun1）落重疊，可分（fèn）辨時仍以2個或2個以上菌落計數。
4.7測試記錄應（yīng）包含以下內容
4.7.1被測試區域名稱、測試日期（qī）、測試（shì）依據、測試者姓名、測試儀器及測試（shì）方法的描（miáo）述，測試時所（suǒ）采用的狀態和（hé）室內（nèi）測試人員數，采樣點數目，測試次數、采樣流（liú）量，測試結（jié）果（包括（kuò）所有統計計算（suàn）資料）等。
4.7.2若為（wéi）動態測（cè）試，還應記錄現場操作人員數量（liàng），現（xiàn）場設備運轉情況（kuàng）等。
4.8結果計算
4.8.1用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
4.8.2每個測點的浮遊（yóu）菌平均濃度計算按下式（shì）進行。
4.9結果評定
4.9.1每個測點的浮遊菌平均濃度必須低於所選定（dìng）評定標準中的界限。
4.9.2在靜態測試時，若某（mǒu）測點的浮遊菌平均菌濃度超過（guò）評定標準，則應重新采（cǎi）樣（yàng）兩次（cì），兩次測試結果均合格才能判（pàn）為符合。
4.9.3若有超過規定者，必（bì）須及時與生產部（bù）門，對該區域進行消毒或其它處理，然後重新測試至（zhì）合格。
4.10日常監控
4.10.1浮遊菌日（rì）常監控（kòng）設糾偏限度和警戒限度（限度範圍及（jí）取樣（yàng）頻次見（jiàn）《潔淨區環境監控管理規程》），以保證無菌室（區）的微生物濃度受（shòu）到控（kòng）製，定期檢測以檢查微生（shēng）物負荷以及消毒劑的效力，並作傾向分析。靜態和動態的監控都可以采用該方法。
4.10.2對於浮遊菌的取樣（yàng）頻（pín）次，如果出現下（xià）列情況應考慮修（xiū）改，在（zài）評估以下情況後，也應確定其他項目的檢測頻次。
（1）連續超過糾偏限度和（hé）警戒限度；
（2）停工時間比預計延長；
（3）關鍵區（qū）域內發（fā）現有汙染存在；
（4）在生產期間，空氣（qì）淨化係統進行任何重大（dà）的維修；
（5）日常操作記錄反映（yìng）出傾向性的數據；
（6）消毒規程（chéng）的改變；
（7）引起生物汙染的事故等；
（8）當生產設備有重大維修或增加設（shè）備時；
（9）當無菌（jun1）室（區）結構或區域分布有重大變動時。
4.11注意事項
4.11.1JYQ-Ⅱ型浮遊菌采樣器經消毒（dú）後先不放入培養皿，開啟浮遊菌采樣器，使儀器中的殘餘消毒（dú）劑蒸發，時間不（bú）少於5分鍾，檢查流量並根據采樣量調整（zhěng）設定采樣時間。
4.11.2單向流無菌室（區）或送風口，采樣器采樣口（kǒu）朝向應正（zhèng）對氣流方向，非單向流無菌室（區），采樣口向上。
4.11.3測試時必（bì）須穿著與被測區（qū）域潔淨度級別要求相適應並經（jīng）高壓滅菌後的無菌服。
4.11.4布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
4.11.5采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內壁和轉盤（pán）（FKC型浮遊空氣塵菌采樣（yàng）器噴射采樣頭和保護（hù）蓋）。
4.11.6應采（cǎi）取一切措施防止采樣過程的汙染和其（qí）他可（kě）能對樣本（běn）的（de）汙染。
4.11.7每批培養基應有對照試（shì）驗，檢驗培養基（jī）本（běn）身是否汙染，可每批選定3隻培養皿作（zuò）為對照（zhào）培養；培養皿在用於檢測時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行對照試驗（yàn），每（měi）次或每個區域（yù）取1個對（duì）照皿，與采樣（yàng）皿同法操作但不需暴露采樣，然後與（yǔ）采樣後的培養皿一起放入培養箱中培養，結果應（yīng）無（wú）菌落生長。
4.11.8采樣前應仔細檢查每個培養皿（mǐn）的質量（liàng），如發現變質、破損或汙染的應剔除。
4.11.9由於細菌種類繁多，差別甚大（dà），計數時一（yī）般用透射光於於培養皿背麵（miàn）或正麵仔細觀察，不要漏計培養皿（mǐn）邊緣（yuán）生長（zhǎng）的菌落，並須注意細（xì）菌菌落或培養基沉澱物的區別（bié），必要時用顯微鏡鑒別。
4.11.10必須定期對恒溫培養箱進行校驗。