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細(xì)胞室簡介及細胞室(shì)管理及設置規(guī)範

更新時間:2016-07-14  |  點擊率:9628

細胞室一般就是負責單克隆抗體、HIV、體細胞(bāo)等治療製劑和診(zhěn)斷試劑、生產用細胞及牛血清等檢驗(yàn)的實驗(yàn)室;並包括負責相應品種國家藥品(pǐn)標準、一類新藥和進(jìn)口藥品標準的技(jì)術審核、複核、修訂或起草等;負責相應品種國家標準(zhǔn)物質的研製、標定和分發;開展相應技術方法研究及技術人員培訓。
病理科細胞室主要(yào)服務於臨床,為臨床醫生提供及時而準確的細胞學檢查結果,它通過無創或微創的方式,既減輕病人檢查時的痛苦又可以獲得(dé)客(kè)觀的結(jié)果(guǒ)。
一、細胞室(shì)如何設置(zhì)
1.無菌操(cāo)作細胞室:
1)由更衣間、緩(huǎn)衝間和操作間三部分組成。
2)更衣間:位(wèi)於培養室zui外部,用於更(gèng)換潔淨的衣帽鞋口罩。放置消毒的(de)防(fáng)護服、衣帽櫃、鞋櫃。
3)緩(huǎn)衝間:位於更衣間與操作間之間,目的是為了保證操(cāo)作間(jiān)的無菌環境。放置電冰箱、液氮灌、消毒好的無(wú)菌物品等。
4)操作間:位於內部,於無菌操作、細胞培養。放(fàng)置淨化工作(zuò)台及(jí)二氧化碳培養箱,離心機,倒置顯微鏡(jìng)等。
房間要求:獨立房間(jiān),按潔淨廠房要求建造,並需要保持空氣消毒和清潔無塵:
1)紫外線燈—產生臭氧,並且室內溫度及濕度均較高,不利於工作人員健康。
2)空(kōng)氣過濾的(de)恒溫恒濕裝置的空氣潔淨度級別如下:
 
注:空(kōng)氣潔淨度級別表:一般普通培養室(shì)常選用100000級的。
2. 準(zhǔn)備室:常設置在無菌操作(zuò)細胞室外部,主要進行培養液及有關培養用的液體等(děng)的製備。主(zhǔ)要設置:離心機、水(shuǐ)浴鍋、定時鍾(zhōng)表、普通天(tiān)平及日常分析處理物。
3. 洗刷消毒間(jiān):要和其他(tā)區域分(fèn)開,獨立一(yī)室,主要用於各種培養器皿的清洗、準備和消毒,常設置:烘箱、高壓蒸汽消毒鍋、去離子水或者蒸餾水處理器、酸缸、水槽(cáo)刷子等。
二、細胞室常用的基本設備
1.儀器:
1)超淨工作台-常用側流式(垂直流)工作台,潔淨度應達到100級。國內產品(pǐn)一般都可以達標。視場地大(dà)小選用一個較寬的或者多個較小的。
2)顯微鏡:倒置熒光顯微鏡,若有條件,尚可(kě)配(pèi)置帶有(yǒu)照相係統的高(gāo)質量(liàng)相差顯微(wēi)鏡、解(jiě)剖顯微鏡、錄像係統或縮時電影拍攝裝置等,以便(biàn)隨時觀察、記錄(lù)、攝影細胞生長情況。
3)CO2培養箱:需國外產品。
4)幹燥(zào)箱:電熱幹燥箱升溫較高,一般需達(dá)到160℃以上。國內產品可(kě)達標。
5)水純(chún)化裝置(zhì):產生去離子水,可用三(sān)蒸水替代。
6)冰箱:低溫冰箱(-20℃)可選國內的、超低溫冰箱(-70,80C,)需(xū)要國(guó)外產品。
7)液氮罐:國內產品可(kě)。
8)離心機:國內產品(pǐn)可,低速離(lí)心機即可,不需要低(dī)溫冷凍。用於(yú)細胞(bāo)沉降,高速不好。
9)精密電子天平:國產即可,需(xū)達到精密度(dù):分析天平(píng)的(de)感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。
10)消毒器:高壓蒸汽消毒鍋,國產(chǎn)。
11)濾器:用於過濾培養基,國(guó)產進(jìn)口都可。
2.常用的培養器皿:
1)培養瓶:由玻璃(lí)或塑料製成。主要用於培(péi)養(yǎng)、繁殖(zhí)細胞。進行培(péi)養時培養瓶瓶口(kǒu)加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多(duō)用於密封培養。國產培養瓶的規格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養瓶則多以底麵(miàn)積(cm2)表示。
2)培養皿:由玻璃或塑料製成,供盛(shèng)取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻(chān)入、細胞繁殖等實驗使用。常用(yòng)的培(péi)養皿規格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
3)多孔培養板:為塑料製品。可供細胞克隆及細胞毒性等各種檢測實(shí)驗使用。其優點是節約樣本及試劑,可同時(shí)測試大量樣本,易於(yú)進行無菌操作。培養板分為各種規格,常用的規格有:96孔、24孔、12孔、6孔(kǒng)、4孔等。
4)培(péi)養操作有關的器皿:
a)貯液瓶:主要用於存放(fàng)或配(pèi)製各種培養用液體如培養液、血清及試(shì)劑等。貯液瓶分為各種不同(tóng)規格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
b)吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻(kè)度吸管(guǎn)主要用於吸取、轉移(yí)液體,常用的(de)有(yǒu)1ml、2ml、5ml、10ml等(děng)規格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可(kě)以作(zuò)吸取、轉移液體外,彎頭尖(jiān)吸管還常用於吹打、混勻及傳代細胞。
c)加樣器(移液器):用於吸取、移動液(yè)體或滴(dī)加樣本。可根據需要調節量的(de)大小,吸量準確、方便。尤以微量(liàng)加樣器,可保證實驗樣品(或試劑)含量,重複性良(liáng)好。目前,可高溫消毒的(de),多通道的各類移(yí)液器可(kě)供使用者選擇,能(néng)確(què)保加樣(yàng)準確、快(kuài)速、方便並且達到無菌要求。
d)其他用品:尚有收(shōu)集細胞(bāo)用的離心管,放置試劑或(huò)臨時插置吸管用的試(shì)管(guǎn),裝放吸管以(yǐ)便消毒的玻璃或不鏽鋼容器,用於存放小件培養物品便於高壓消毒的鋁製飯盒或貯槽,套於吸管頂部的橡膠吸頭,封(fēng)閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用(yòng)的安瓿或凍(dòng)存管、不同規格的注(zhù)射(shè)器、燒杯和量筒以及漏鬥,超淨工作台使用的酒精燈,供實(shí)驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒(dú)液的微型噴壺(hú)等。
三、細胞室管理規章製度
細胞室是進行各種細胞培養的淨化級實驗室,所有進入實驗(yàn)室的人員(yuán)都必須遵守實驗室有關的(de)規章(zhāng)製度,接受實驗室(shì)管理人員的管理。
*章 總則(zé)
*條細胞室主要(yào)由團(tuán)隊內相關科研人員使用,原則上不對外開(kāi)放,其(qí)他人(rén)員如確實需使用(yòng)細胞室必須(xū)預先征得實驗室(shì)負責人和細胞室負責人同意。
第二條進出細胞室實(shí)驗需要嚴格登記。如有不符合(hé)實驗室工作和生物安全要求的,實驗(yàn)室負責(zé)人和(hé)細胞室工作人員有權責令整改。
第三條使用人員需參加專門的(de)細胞室使用規範培訓並通過考核後,方(fāng)可獲準進入細胞室(shì)進行實驗。嚴禁未經許可擅自進入細胞室或使用相關設備。
第四條細胞(bāo)室正常使用過程中,人員進出應通過緩衝間和風淋間;進出實(shí)驗室(shì)的器械和樣品(pǐn)需通過傳遞窗(chuāng),嚴禁(jìn)隨身帶入(rù)。實驗用(yòng)品應盡(jìn)量(liàng)一次帶入,嚴禁將與實(shí)驗(yàn)無關的(de)物品(pǐn)帶(dài)入實(shí)驗室,在細(xì)胞(bāo)室內不得進行微生物等其它易汙染物的培養,禁止從事任何高(gāo)危生(shēng)化實驗。
第五(wǔ)條實驗(yàn)人員應愛護實驗室各類儀器,按照規則使用並保持設備清潔。實驗中的昂貴設備,未經許可不得擅自開關。精密儀(yí)器需經專門培訓後方能操作未經許可不得改變設備儀器的預設參數。設備儀器出現故障或發生事故,應及時向實驗室負責(zé)人報告,安排專(zhuān)業人員進行檢(jiǎn)修。
第二章 條例
*條(tiáo) 常規操作
1.穿著實驗服。實驗(yàn)人員必須在(zài)細胞室緩衝間內更換細胞室實驗服,嚴禁不穿實驗服或直接(jiē)穿著普通實驗(yàn)室實驗服進入(rù)細胞室。
2.穿著(zhe)拖鞋。在準(zhǔn)備間換下自己的鞋子,盡量(liàng)避免在(zài)緩衝間走動、停留。
3.細胞室zui多(duō)可6個人(rén)同時使(shǐ)用。
4. 實驗過程中嚴禁喧嘩,閑聊,反複進出(chū)細(xì)胞室。
第二條 培養箱使用規則
1. 從培養箱取放物品前(qián),用酒精清潔雙手(或手套),盡(jìn)量縮短開門時間和減少開(kāi)門次(cì)數。
注: 培養箱中的(de)空氣是經過過濾的潔淨空氣。長時間敞開或頻繁開關培養箱,容易造(zào)成汙(wū)染。
2.從(cóng)培養箱(xiāng)拿取細胞時輕拿輕放,動作迅速,隨手關緊培養(yǎng)箱門。未經允許,禁止(zhǐ)翻看、移動他人細胞或樣品(pǐn),如有特殊需要的,請實驗室(shì)負責人協調。
3. 培養瓶皿放入培養箱前,用酒精消毒表麵,並稍等至酒精揮發後再放入,以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
4. 培養箱內細胞培養的放置需整潔有序(xù),方便查找,同時應盡量提高培養箱的使用效率,負責老師可視實驗情況啟用或停止空培養箱的使用,節約資源。
5. 普通培養中的細胞(bāo),若非(fēi)實驗特殊需要,每瓶(píng)/板細胞每天隻需要觀察生長狀態一(yī)次,2人以上共用的細胞,可(kě)約好時(shí)間一起觀(guān)察。
注:頻繁將細胞拿出觀察,容易給培養箱造成汙染,同時也會(huì)影響細胞生長(zhǎng)條件的恒(héng)定。
6.原代細(xì)胞需放置在(zài)原(yuán)代培養培養箱培養,不得(dé)放置於其他培養箱,如(rú)一段時間內(nèi)無原代細胞實驗,負責人可(kě)協調安排培養(yǎng)箱供其他細胞培養使用。
7.實驗人員應經常注意檢查培養箱溫度、CO2氣體(tǐ)量是否相符設定值。密切注意培養箱內的增濕盤,定期更換無菌水並進行消(xiāo)毒(dú)。密切注(zhù)意培養箱內情況,如出現黴變、菌斑、支原體(tǐ)和衣原體(tǐ)感染(rǎn)或其(qí)他明顯(xiǎn)染菌跡(jì)象,應(yīng)立即通(tōng)知管理員及其它使用者(zhě)。
第三條 顯微鏡使用規則
1.倒置(zhì)相差顯(xiǎn)微鏡使(shǐ)用前,用酒精棉從(cóng)中間至周圍擦拭載物台。
2.離開(kāi)細胞室時(shí)或較長時間不需使用時,及時關上電源,延長燈泡壽命。盡量(liàng)避免(miǎn)頻繁開關顯微鏡電源。
3.一次細(xì)胞實驗使用完畢(bì)後,在顯微鏡使用記錄本上登記。
4.熒(yíng)光顯微鏡屬於貴重(chóng)儀器需遵循貴重儀器預約使用規程。
第四條 超淨台相關(guān)操作規則
1.超淨(jìng)台使用遵循預約(yuē)原則。在細胞室入口處(chù)預約,細胞室內填寫使用登記。
a:無預約者若有必要在他(tā)人(rén)預約時段內使用(yòng),需先征得預約者的同意,否則應無條件讓出工作(zuò)台,以免耽誤他人實驗。
b:使(shǐ)用記號筆(bǐ)在預約表格上提前預約下一周(zhōu)的使用(yòng)時間(jiān),請(qǐng)注意周六周日是指上周的周末(mò)。
c:預約內容請包括:時間範(fàn)圍,姓名,如特殊實驗(yàn)請寫明(míng)。
2.超淨台使用前用紫外燈照射15分鍾滅菌,使用前、後需用酒精棉球擦拭工作區消毒,所有(yǒu)物品放入超淨台內使用前均應消毒,超淨台內嚴禁堆放過多物品影響風路平衡,不(bú)同(tóng)超淨台內物品(pǐn)嚴禁頻繁交換使用。
3.點燃酒精燈前需檢查瓶中酒(jiǔ)精是否足夠,液麵應占瓶高1/3-2/3。
注: 消毒用75%的酒精,酒精燈用(yòng)95%以上的酒(jiǔ)精,向噴壺或燈內添加酒精時請留意。
4.超(chāo)淨台中應擺放廢液杯,用於暫時存放廢棄物,實驗結束後將杯內加入NaOH溶液處理片刻,廢液垃圾倒入水池並同時用水衝釋,固體垃圾倒(dǎo)入生物樣品垃圾桶中。
注: 廢液缸應及時處理,嚴禁長時間放置,以免留有大量培(péi)養(yǎng)液滋生細菌。
5.細胞實驗後任何含有(yǒu)細胞培養汙物的培(péi)養瓶,離心管,移液管等必須及時(shí)帶出(chū)細胞房。
第五條 器具的清洗規則
1.可回收的移液管、離心管、培養瓶皿等,放入裝有清水的塑料桶中浸泡,桶內需有足量的清水以沒過(guò)浸泡物品。
注: 可回收器皿必要時先初步涮洗後再放入桶內,尤其是培養瓶或血清管(guǎn)中有大量高營養(yǎng)的液體殘留時,容易使(shǐ)桶內的(de)清水長菌。保證浸泡的瓶、管內*被清水(shuǐ)充滿,而不是在裝有大量(liàng)空氣的情況下(xià)被壓倒桶底。  
2.清水衝洗後及時放入(rù)酸缸浸泡,應由使用者本(běn)人(rén)及(jí)時清洗晾幹(gàn)備用,操作時請注意帶橡膠手套,小心(xīn)操作(zuò)。
注: 禁止長時間(jiān)浸泡於清水中,此時細菌可能已在桶中生長並釋放內毒素。細菌內毒(dú)素很難通過常規濕熱滅菌步驟去除幹淨,即(jí)使(shǐ)幹烤也(yě)不能(néng)保證其*失活。內毒素對細胞(bāo)生長及多種實驗均有(yǒu)較大影響。
洗滌程序(xù):清水衝十次以上去(qù)除重金屬殘留,然(rán)後衝去離子水5次,再用超純水5次,倒置於烘箱中晾幹。並及時包(bāo)紮滅菌。
第六條 冰箱(xiāng)、試劑等相(xiàng)關操作規則
1.從冰箱取放物品(pǐn)動(dòng)作要迅速,關門時要檢查門是否關好。按類別存放試劑。嚴禁長時間敞開冰箱門。
2.各人存放於冰(bīng)箱內的培養液、生化試(shì)劑、樣品要注明姓(xìng)名、配製日期、樣品名稱,特殊(shū)試劑需獲得細胞室管理人員同意後(hòu)方能放(fàng)置。不得使(shǐ)用他人的培養液或其他生化試劑。
3.分裝好的血清長時間保存於-80℃,使(shǐ)用前放於4℃預解凍。原(yuán)則上解凍好(hǎo)的血清應全部配成含血(xuè)清的培養基(jī)備用,若有剩餘,則暫存於4℃並盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清,以免交叉汙染。
4.細胞室內的冰箱空間有(yǒu)限(xiàn),盡量僅放置使用頻率較高的試劑。請勿將一些閑(xián)置試劑,汙染試劑長(zhǎng)期放置在細胞室。
5.工作人員會定期對冰箱進行清理,發現無標記,過期試劑等違規(guī)物品(pǐn)將全部清除出去,並且查找(zhǎo)試劑配置人給予警告。
第七條 進入(rù)細胞室物品控製
1.所有進入細胞(bāo)室的物品需經(jīng)過傳遞窗,盡量經過(guò)紫外照射,酒精表麵消毒。
2.嚴禁將可能含有汙(wū)染物或病原(yuán)菌的實驗物品帶入細胞室。
3.細胞室內僅放置少(shǎo)量實驗必須耗材即可,不得整(zhěng)箱搬入,出現潔淨室內物品堆積狀況。
4.細胞室內儲物櫃的物品放(fàng)置由(yóu)相關管理人員安排,並做標記(jì)。
第八條 細胞室清(qīng)潔守則
1.每周(zhōu)值(zhí)日生時間從周六開始,至下周五結(jié)束。
2.日常維護:注意培養箱顯示正常,顯微鏡,冰箱,超淨台的正常(cháng)使用與維護(hù)。細胞室(shì)內以及門口(kǒu)生物樣品垃圾桶的及時清理。
3.每周大清潔:每周五下(xià)午五點(diǎn)用新潔爾滅打掃細胞室。
清潔(jié)順序:擦超淨台(用酒精棉球);用新(xīn)潔爾滅(miè)擦(cā)桌麵,培(péi)養箱,超淨台以及冰箱(xiāng)外壁,及桌(zhuō)上的儀器,細胞室牆麵,傳(chuán)遞窗(chuāng),風淋室;給水浴鍋(guō)加(jiā)水或換水,細胞室衣櫃和拖鞋擺放整齊,拖地(dì),紫外消毒細胞室30分鍾。
注:若上周值日生(shēng)及時給培養箱內水槽加足水,根據經驗未來一周內培(péi)養(yǎng)箱不會幹水,但值日生仍應經常檢查,以便及(jí)時發現異常(cháng)情況(kuàng)。切記給培養箱加滅菌水。
4.在(zài)沒有(yǒu)出現問題的情況下(xià),每2個月清潔一次培養箱:先將培養箱中的物品取出(chū)暫存於超淨(jìng)台(tái)內,對於比較敏感的(de)細胞(bāo)可以暫存(cún)於另一個培養(yǎng)箱;將培養箱內(nèi)的不鏽鋼板取出,包括4塊(kuài)橫(héng)板和左右2塊立著的架子,用酒精棉球清潔鋼板和(hé)培養箱內壁;啟動(dòng)培養箱自(zì)消程序。
第九條 人員培訓(xùn)
1.由將要做細胞實驗的人(rén)員(yuán)提出(chū)申(shēn)請,填寫細胞室使用申請表。
2.細胞室負責老師視申請人數酌情安(ān)排(pái)培訓時間,培訓內容包括(kuò)安全培訓、理論知識與實踐操作培訓。
3.培訓考核合格後由導師、培訓(xùn)老師、細胞室負責人簽字確認授予其細胞室使用權限。
4.培訓不合格者(zhě)重新參加培訓。
第十條 製度的實施與處罰
1.細胞室負責人以及管理人員密切關注細胞室的使用情況,發現違反規章操作者首先給(gěi)予提醒(xǐng),但須做記錄。
2.對於一(yī)周內違反3次以內(nèi)者(zhě)予以警告,3-5次者給(gěi)予停(tíng)止細胞室使用權限2周,超過5次者停(tíng)用(yòng)其對細胞室使(shǐ)用權限,需重新參加培訓後才能再(zài)次使用。
第(dì)三章 附則
本規章製度(dù)從公布(bù)之日起開始執行,由生物醫學工(gōng)程團隊實驗室管理委(wěi)員會負責解釋及更正。本實驗(yàn)室追求不斷地進(jìn)步,各位老師及使用人員若(ruò)有良好的建議可與細胞室負責人或實驗(yàn)室管理委(wěi)員會成員溝通,我們會及時協調(diào),旨在為團隊提(tí)供和諧,的實驗條件。


 


 

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