藥品生產企（qǐ）業微生物實驗室設計探討

1、前言
藥品檢驗實驗室通常包含理化（huà）實驗室和微生物實驗室兩（liǎng）部分；理化實驗室運用物理、化學的（de）方法對生產用的（de）原輔（fǔ）料、包裝材料（liào）、中間體及成品等進行鑒別、含量測（cè）定等分析和檢驗，其結果作（zuò）為檢品是否符合（hé）法定要求和企業內部質量標準的依據。
微生物（wù）實驗（yàn）室一般具有以下功能：
①按《中國藥典》要求，進行微生物檢驗方（fāng）法的驗證、無菌檢查、微生物（wù）限（xiàn）度檢（jiǎn）查、抗生素效價的微生物檢定、青（qīng）黴素酶及其活力測（cè）定。
②按現行《藥品生產質量管理規範》的（de）要求，對醫藥工業潔淨室的潔淨（jìng）度進行微生物測（cè）定，對無菌生產區環境日（rì）常動態（tài）監測以及生產過程中其他需要（yào）進行微生物檢測（cè）的地方（fāng），如對無菌過濾器的驗證、環境（jìng）及設備消毒（dú）效果（guǒ）的驗證、滅菌效果的驗（yàn）證、無菌藥品包裝（zhuāng）密封性驗證中微生物挑戰（zhàn）性試（shì）驗等。
③細菌內毒素檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖不是檢查（chá）微生物，但它們對檢查環境有較（jiào）高的要求，通常設（shè）在（zài）微生物實驗（yàn）室。
2、微生物實驗室設計（jì）的有關要求
《藥品生（shēng）產質量管理規範》要（yào）求藥品生產（chǎn）企業（yè）應負責藥品生產全過程（chéng）的質量管理和檢（jiǎn）驗，並配（pèi）備與藥品生產規（guī）模、品（pǐn）種、檢驗要求相適應的人員、場所（suǒ）、儀器、設備。在進行（háng）微生物實驗室（shì）的設計時，應了解檢驗流程、過程性質、有關標準規範的規定等，結（jié）合（hé）藥品生產企業生產品種、檢驗工作量的大小合理布置相應（yīng）的微生物檢驗功能間。在藥（yào）品的微（wēi）生物學檢驗中，為了保證檢測結果的準確、可靠，針（zhēn）對微生物學檢驗產生影響的（de）幾種因素（sù）需要采取相應的措施，通常為（wéi）以下幾種：
①藥品本（běn）身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會掩（yǎn）蓋無菌藥（yào）品已受汙染的事實或造成低於實際汙（wū）染水平的菌檢結果。通常采用生長比較法，在實際檢驗條件下，通過比較對照接種試驗菌或陽性菌在有無供試品的狀（zhuàng）態下的生（shēng）長情況，來驗證供（gòng）試品在（zài）該檢（jiǎn）驗方法下的抑菌性。
②標準菌種（試驗菌或陽性菌）製（zhì）備與傳代、種（zhǒng）類及生長（zhǎng）狀態需符合現行《中國藥典》要求。
③培養基的促菌生長能（néng）力：培養基（jī）應具備廣譜性，有助於（yú）檢品中所（suǒ）有（yǒu）存活微生物的生長。通過接種（zhǒng）不同試驗菌並觀察它們（men）的生長狀（zhuàng）態，進行培養基靈敏度驗證試驗（yàn）。
④檢驗（yàn）器具，如過濾係統（tǒng）的濾器、濾膜性質、材質等性能，淋（lín）洗液、稀釋劑、培養基（jī）的（de）無菌性及操作程序等，通常進行（háng）陰性對照試驗來（lái）檢驗其影響。
⑤培養（yǎng）條件（溫度、濕度（dù）及需氧或厭氧）及檢（jiǎn）測環境應符（fú）合相關要（yào）求。
2.1無菌檢查實驗室
2.1.1用途
用於檢查藥典要求無菌的（de）藥品、醫療器具、原（yuán）料（liào）、輔料及其他品（pǐn）種是否無菌。
2.1.2《中國藥典》對無菌檢查實驗室要求
無菌檢查應在環境潔淨度（dù）10000級下的局部潔淨度（dù）100級的單向流空氣區（qū）域內或隔離係統中進（jìn）行（háng），其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物汙染。單向流（liú）空氣區、工作台麵及環境應定期按《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降（jiàng）菌的測試方法》的現行國家標準進行潔淨度驗證（zhèng）。隔（gé）離係統（tǒng）按相關的要求進行（háng）驗證，其（qí）內部環境的潔淨度須符合無（wú）菌（jun1）檢查的要求。
2.2微生物限度（dù）檢查實驗室
2.2.1用途
用於檢查非規定滅菌製劑（jì）及其原料（liào）、輔料受微生物汙染的程度。檢查項目包括細菌數、黴菌數（shù）、酵母菌數及控製菌檢查。
2.2.2《中國藥典》對微（wēi）生物限度檢查實驗室的要求
微生物限度檢查應在環境潔淨度10000級下的（de）局部潔淨度100級的單（dān）向流空氣區域內進行。檢驗全過（guò）程（chéng）必（bì）須嚴格遵守無菌操作，防止再（zài）汙染。單向流空氣區域、工作台（tái）麵及環境應定期（qī）按《醫藥工業潔淨室（區）懸浮粒子、浮遊菌和沉降（jiàng）菌的測試方法》的現行國家標準進行潔淨度（dù）驗證。
2.3抗生素效（xiào）價的微生物檢定室
2.3.1用途
在適宜條件下，根據量（liàng）反（fǎn）應平行線原理設計，通過檢測抗生素對微生物的抑製作用，計算抗生素活性（效價）。
2.3.2《中國藥典》對抗生素效（xiào）價的微（wēi）生物（wù）檢定室的環境潔淨度未有明確規定要求
在國家食品藥品監督管理局（jú）2000年9月頒發的《藥品檢驗所實驗室質量管理規（guī）範（fàn）（試行）》中第十八條中規定有“抗生（shēng）素微生物檢定實驗室分為半無菌（jun1）操作間和緩衝間。半無菌操作間設有紫外線燈，操作台宜穩固，並保持水平。實驗室內應光線明亮，並有（yǒu）控製溫度（dù）、濕度（dù）的（de）設備”。通常按潔淨度（dù）100000級設（shè）計（jì）。抗生素效價的微生物檢定實驗所用燒杯、漏鬥、移液管、容量瓶、滴管、小（xiǎo）鋼管等器皿應與其（qí）他器皿分（fèn）開洗滌，檢定用平板與其他培養基（jī）平板也（yě）應分開洗滌，防止抗生素對其他微生物培養的汙染。
2.4細菌內毒素檢查用室
2.4.1用途
利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產生的細菌內毒（dú）素，以判斷供試品中細菌內毒素的*是否符合規定。適用於某些不能（néng）用家兔進行熱原（yuán）檢測的品種（zhǒng），如放射性藥劑腫瘤抑製劑等，因為這些製劑具有細胞毒性而有一定的生物效應。目前一般認為特別適用於生產過程中（zhōng）的熱原（yuán）控製（zhì），因為該檢查法操作簡單，實驗費用（yòng）少，結果迅速（sù）可得。但該（gāi）檢查（chá）法對革（gé）蘭陰（yīn）性菌以外的內毒（dú）素不夠敏感，故尚不能代替家兔熱原法。
2.4.2《中國藥典》中要求
進行細菌內（nèi）毒素含量測定試（shì）驗所用的器皿需經處理，以（yǐ）去除可能存在的外源性內毒素，試驗操作過程應防止微生物的（de）汙染，在清淨環境中進行，在層流工（gōng）作台內操作。實驗（yàn）前，須（xū）用肥皂（zào）洗手，用75%乙醇棉球消毒。但（dàn）《中國藥典》中未對細菌內毒素檢查用室的環境潔淨度（dù）明確規定要求。一般來說細菌內毒素檢查用室為半無菌操作間：室內設滅（miè）菌紫外燈，潔淨度（dù）要求一般為100000級。也有（yǒu）一些藥廠為了節省（shěng）能耗而將其設置為一般環境（jìng）。
2.5不溶性微粒檢查用室（shì）
2.5.1用途
在（zài）可見異物檢查符合（hé）規定後，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中（zhōng）不溶性微粒（lì）的大小和數量。
2.5.2《中國藥典》要求
試驗操作環境應不得引（yǐn）入微粒，測定（dìng）前的（de）操作應在層流淨化台下進行。玻璃儀器和其他所需的用品應潔淨無微粒，本法所用微粒（lì）檢查用水（或溶劑）使用前須經不大於1.0um的（de）微孔濾膜（mó）濾過。
2.5.3因《中國藥典》要求注射用水須進行細菌內毒素檢測，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與細菌內毒素檢查用室設成一間，不用專設一室，配置相應的層流淨化工作（zuò）台。
3、其它問題
3.1陽性接種室
（1）微生物檢驗離不開對標準菌種及所檢測的菌種（zhǒng）進行各種處理，如培養基的靈敏度檢查、無（wú）菌檢查及微生物限度檢（jiǎn）查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微生物檢定時菌種及（jí）菌懸液製備、轉接種等，這些活動要直接處理微生物（wù）菌種，在一定條件下（xià），許多種類都（dōu）是病原菌，因此有關微生物暴露性操作活動盡可能在（zài）生物安全櫃內進（jìn）行（háng）。所有染菌物品、培養物均應經高壓滅菌處理（lǐ）後（hòu）再（zài）清（qīng）洗。
（2）無菌（jun1）檢查及微生物限度檢查中（zhōng）陽性對（duì）照菌液加入含供試品的培養基的操作，不能（néng）在檢測供試品的無菌室或淨化台上（shàng）進行，以免汙染供試品及操作環境。可設置一間陽性接種（zhǒng）室進行上述（shù）操作。以前有的將其設置為一般環境；有（yǒu）的根本就（jiù）未專設此室。《中國藥典》（2005年版）頒發後，目前許多人認為將其設置為潔淨度10000級，設（shè）置單獨的人淨、物淨係（xì）統。
3.2無（wú）菌室（shì）
《中國藥典》要（yào）求（qiú）無（wú）菌藥品的無菌性檢查室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環境（jìng）潔淨（jìng）度（dù）都為10000級（局部（bù）潔淨度100級），通常都稱為無菌室；若某藥廠既生產無菌藥品（pǐn），也生產非無（wú）菌藥品，為（wéi）防止非（fēi）無菌藥（yào）品（pǐn）供試品對無菌藥品的無菌性檢查的汙染，有兩種方式（shì）：
①如果同時進行這兩類藥品的（de）檢驗，將這兩種無菌室分開設置二（èr）套，使用各自的人淨、物淨係（xì）統。此（cǐ）種方式無菌室利用（yòng）率不高。
②通常隻設一（yī）套無菌室，分期進行這兩類藥品的檢驗，合理安排（pái）檢（jiǎn）驗規程、嚴格操作並經驗證，確保不對無菌藥品的無菌性檢（jiǎn）查產生汙（wū）染。
3.3隔離係統
《中國藥典》無（wú）菌檢查（chá）法中被為可使用（yòng）的設（shè）施，它能提供並保持與外界環（huán）境隔離的（de）百（bǎi）級潔淨度的操作（zuò）環境。隔（gé）離操作器（qì）所處環境的級別取決（jué）於它們的設計（jì）及其應（yīng）用。美國藥典（diǎn）並不要求它安裝在潔淨（jìng）區/室，但應控製無關人員進入其（qí）所處房間；歐盟GMP則建議應將（jiāng）它放置於100000級的環境中。采用隔離操作技術能大限度降低操作人員和外界（jiè）環境對潔淨空間的（de）影響。它既（jì）可用於無菌實驗（yàn），又可用於其他需要高（gāo）潔淨度的（de）多種（zhǒng）研究和（hé）實驗。但隔離（lí）操作器（qì）的性能與操作程（chéng）序的（de）驗證尤為重要，隔離用袖管/手（shǒu）套係（xì）統應進行常規監測，這包括經常進行必要的檢（jiǎn）漏試驗。隔離（lí）係統的諸多優勢如潔淨區域的隔離化、自動化、小型化等將（jiāng）使其成為無菌區的發展未來。
3.4培養室
用來放置培養各類微生物生長的細菌培養（yǎng）箱和真菌培養箱。大多數將其設置為一般環境；也有的將其潔淨度（dù）設置為100000級。設（shè）計時根據藥廠（chǎng）相關部門（mén）的要求進行。