環境微生物的快速測（cè）定法

一、菌落染色法
在含有氧化（huà）還原（yuán）顯，色試劑四唑嗡（wēng）紫羅蘭等的瓊脂平板培養基上培養微生物，或者在普通的瓊（qióng）脂平板培養基上培養後，經過染色，很容易判別菌落是一種比標準培養時（shí）間更短的計測菌（jun1）落的方法。
微觀染色用於對培養結束的膜過濾器直接滴下染色液，然後讓其幹燥，將染成青色的菌落拿到10～20倍的放大（dà）鏡（jìng）下進行計測。培養時間可以縮短到原來（lái）方法的1/4～1/2。
二、阻抗法
微生物在增殖過程（chéng）中會將蛋白質、碳水化合物等（děng）高分子化合物，分解（jiě）成有機酸、氨基酸等離子化合物，這些（xiē）離子化合物達（dá）到一定濃度，在周圍環（huán）境中將產生微小的電量變（biàn）化。將這（zhè）個電（diàn）量的變化利用電阻、導電性或者靜電容量這些概念檢測的方法，稱為阻抗法。產生電量（liàng）與開始時的細菌數、菌的增殖（zhí）性成反比。因（yīn）此，從預先求得的兩者的標準曲線中可以推算出樣（yàng）品中初始的細菌數（shù）。作為產（chǎn）品化的係統有氣（qì）壓（或液壓）傳輸係統以及細菌計數器。
實際操作（zuò）如下（xià）：往容器中添加（jiā）液體（tǐ）培養基和樣品，放在組成係統的培養裝置中開（kāi）始培（péi）養。測定機逐時的自動（dòng）監測培養過程中電量的變化。
本測定方法（fǎ）必（bì）須培養，但它和原來計測菌落的方法（fǎ）相比，優點在於培養時間可以（yǐ）縮短。培養開始後（hòu）直到結（jié）果的打印輸出*自動化，初始投資高（gāo）但運行費用低。另外，通過組合選擇（zé）性培養基，可應用於檢測特定微生物（wù）。
三、氧化電極法（fǎ）
氧化電極法（fǎ）是一種將微生物增（zēng）殖（zhí）過程中的呼吸活性通過氧化電極檢（jiǎn）出的（de）方法。與阻抗法一樣，通過（guò）自（zì）動（dòng）監測，逐時的測定隨培養進（jìn）度而產生的培養基中溶解氧的濃度，直到能夠檢出呼吸活性的培養時間，從這一時間推算樣品中的開始菌數（shù）。測定時，向裝有氧化極的容器中添加液體培養基和樣品，然後放在組成係統的培養裝（zhuāng）置（zhì）中開始培養，測定機自動監測培養（yǎng）基中溶解氧濃（nóng）度的逐時變化。6h內就可以檢出105CFU/g的開始菌數。
四、顯色法
顯色法是（shì）一種通過標識色素的色調變化來檢測隨微生物代謝產生（shēng）的培養基pH值的變化和CO₂生成的方法。通（tōng）過（guò）自動監測檢測出培（péi）養（yǎng）過（guò）程中標識色素的色（sè）調變化，從直到可以檢測（cè）出色調變化（huà）的這一段培養時間推算出樣（yàng）品中（zhōng）的開始菌數。以培養基pH值變化（huà）為指標的維夫斯、以CO_{2生成為指標的敏化培（péi）養基/生物材料20都已產品化。
維夫斯使用容器，此容器中盛有（yǒu）包（bāo）含標識色素的瓊脂層與液體培養基（jī）。使用時，向容器中（zhōng）添加樣品，放入組成係統（tǒng）的培養裝置（zhì）中開始培養（yǎng）。檢出時間受開始菌數多少的影響，但如果達到106CFU，7個小時就可以檢出。通過組（zǔ）合選擇性培養基，也（yě）可應用於特（tè）定微生（shēng）物的檢出。}
以上四種方法仍需培養，隻是培養時間較傳統方式縮短，有助於改善生物汙染控製的工作效率，屬（shǔ）於一類。以下幾種方法則無需培（péi）養，屬於另一類環境微生物快速測定法。
五、熒光染色法
利用熒光染（rǎn）色劑熒光染色細胞膜和細胞核等，使用熒光顯微鏡等將細菌檢出的方法。染色機理不同的多種熒光染色劑，根據（jù）不同的組合也能識別出活菌和死菌（jun1）。染（rǎn）色掃描RDI及D計數、真菌監視器掃描、生物絮凝等都已產品（pǐn）化。
染色掃描RDI在薄膜過濾器上過濾樣品（pǐn），熒光染色阻擋在薄膜（mó）過濾器上的微生物後，再進行（háng）激光掃描。熒光染色的30min，激光掃描3min即可結束。其（qí）結果可以作為圖像表示在監測器畫麵上，也可以（yǐ）自動計測產生熒光的（de）點數。D計數以及真菌監視器掃描是結合了熒光染色法與流體檢查計數法的方法，可以連續測定液態樣品（pǐn）。
六（liù）、LAL試驗法
LAL試驗法是利用鱟屬的血球抽出物，檢測來源於革蘭氏（shì）陰性菌的內毒（dú）素的方法。內毒素是革蘭氏陰性（xìng）菌細（xì）胞壁成分的脂多糖，可（kě）以作為革蘭氏陰性菌的指（zhǐ）標。
七、SLP試驗法
SLP試驗法是利用蠶血液成分檢出（chū）肽聚糖及β-葡（pú）聚糖的方法。肽聚糖是細菌（jun1）的細胞壁成本，β-葡（pú）聚糖是真菌的細胞（bāo）壁（bì）成分。因此，通過本試（shì）驗法能夠檢出這些微生物。不過，每個微生物的肽聚糖及β-葡聚糖（táng）含量因菌株不同而差異很大，與LAL試驗法一樣，不能定量（liàng）微生物，而且也（yě）不（bú）能識別出式來源於活菌還是死菌。
八、ATP快速測定法（fǎ）
ATP是高能磷酸化合物，分解時產生的能量用於細胞內各種有能量需（xū）求的反應。即ATP在地球上（shàng）所有活著的細胞（bāo）內發揮著類似於電池的功能，它的存在成為生命活動的證據。
（1）ATP法的測定原理
ATP法是利用螢火蟲尾部發（fā）光反應的微生物測定法。來源於螢火（huǒ）蟲的熒光素酶催化反應，以高量子收獲率變（biàn）換具有ATP的化學能源而發光（guāng）。反應結果產生的光的數量即發光量和ATP量成正比，通過測定發光量就可以定量ATP。ATP不但存在於細菌體內，而且（qiě）廣泛存在遊離於細菌體外的（de）狀（zhuàng）態。細菌（jun1）外ATP是指從活細菌中溶析出來，細菌死（sǐ）時被（bèi）逐出，而且被包含在有機汙染中。細菌（jun1）外ATP影響活菌數（shù）的測定，因此在前處理（lǐ）階段必須除去（qù）。另（lìng）一方麵，驗證潔淨度時，用細菌內外ATP量的總和（ATP總量（liàng））為汙染指標的方法，在能夠檢出微生物及其溫床汙染兩個方麵的意義上是（shì）合理的。ATP法操作簡單且（qiě）能快速（sù）得到結果。
（2）以菌體內ATP量為指（zhǐ）標測定活菌數
根據ATP法求活菌數時，在前處理階段必須除去細菌體外的ATP。除去ATP的方法有酶化分解消去法和薄膜過濾器（qì）過濾除（chú）去法。酶化法原則上能適用（yòng）於各種樣品，但含有高濃（nóng）度的蛋白質和脂肪的樣品，有時不能充分除去細菌體外的ATP，測試前必須確認去除效果。而薄膜過濾（lǜ）器法不能用於引起堵塞的樣品，但它（tā）不僅可以（yǐ）除去細菌（jun1）外的（de）ATP，而且還可（kě）以除去妨礙發光反（fǎn）應（yīng）的（de）物（wù）質，進而使微生物濃縮，有助於測試。
（3）空氣（qì）中浮遊菌數的測定
用空氣取樣（yàng）器將空氣中浮遊菌（jun1）捕集到（dào）瓊脂培養基上進行培養之前，與原來方法相同。原（yuán）來方法是培養（yǎng）2天後計測出現的菌落，與此相對，利（lì）用ATP法檢測細菌成功的將培（péi）養時間縮短到6h。
根據NASA標準，在ISO 8級食品廠的潔淨室（shì），取樣（yàng）空氣量為10ft³的條件下，探討與原（yuán）來方法的相關性。兩測定值具有（yǒu）相關性，但其相關性很小，隻能推算出大致的空（kōng）氣中浮遊菌數。一般（bān）認為（wéi）這是由於多種微生（shēng）物浮（fú）遊於空氣中，各種微生物（wù）增殖速度和ATP含量不同（tóng）的緣（yuán）故。但是，雖不能準（zhǔn）確求出細菌數，也可用於判定級別等某種（zhǒng）程度上放寬範圍的評價。