微生物汙染的檢測采樣

1、生物汙染的（de）檢測采樣儀器的選擇原則
（1）了解與分析所需采樣的活性（xìng）粒子的類型
由於（yú）不同微生物自身的粒徑不等，生存形態各異，有效的載體不同等等，這些區別與差異都會影響采樣（yàng）方法和采樣儀器的選擇。因（yīn）此，必（bì）須有針對性的選擇采樣儀器方能獲得可靠的測（cè）量值，在這一點上（shàng）與空氣中懸浮微粒的檢測相比顯得更為複雜。
（2）該活性粒子對采（cǎi）樣方法的敏感性
例如某些活粒子凝塊易被衝擊（jī）采樣器的衝擊力所破碎，造成活性粒子采樣的機械損失而影響（xiǎng）采樣效（xiào）率。對於此類（lèi）活性粒子則宜避免選用這類采樣方法。
（3）活（huó）粒子的預期濃度
這也是需要根據經驗作出預判斷的一（yī）個方麵，例如活粒子濃度很高時，在某種儀器的小采樣量條件下獲得的采樣結（jié）果，也會因菌落重（chóng）疊，難於計數，而造成較大的檢測誤差。
（4）危險（xiǎn）區的可（kě）達性
所設定的生（shēng）物汙（wū）染控製危險區往往不適宜采樣（yàng）或（huò）采樣的風險較大。例如，靠近手術切口上方空氣的含菌濃度是空氣環境對感染率產生影響的敏感部位（wèi），而恰恰（qià）在（zài）這個部位進行檢測采樣存在較多的（de）困難與隱患，可能影響（xiǎng）、幹擾醫護人員的操作，存在較大的（de）醫療事故風險。對於（yú）手術中的這個生（shēng）物汙染控製的危險區域，采樣儀（yí）器往往是（shì）不能進入的，即（jí）存在不可達性的問題。基於這種情（qíng）況，就要安（ān）排其它合（hé）適的檢測采樣位置（zhì），而該部位的測值應是（shì）能反（fǎn）映（yìng）危險區域生物汙染控製效果的（de）。
（5）極低程度生物汙染（rǎn）的檢（jiǎn）測能力
對於這種情況要事前（qián）判（pàn）定所選采樣儀器是否能反映真實情況。譬如在ISO 5級以上的潔（jié）淨室中，由於（yú）空氣潔淨度很高，懸浮微粒稀少，如用沉降平皿采樣，則（zé）其平皿數或沉降麵積和暴露時間都（dōu）要大量增加（jiā），才有可能滿足檢測概率的要求。否則，按（àn）常規方法操作，平皿的讀值都可能為“0”，但這並未反映低濃度汙染（rǎn）的真實情況。因此，在對（duì）極低程度（dù）生物汙染環境選擇檢測儀器和方法時，要格外重視（shì）其檢測能力。如果使用其它帶吸（xī）氣（qì）動力源的微生物采樣裝置時，其采樣空氣量（liàng）、采樣持續時間也應與一般汙染環境（jìng）不同，要依據采樣概率（lǜ）來分析（xī）與計算必（bì）要的采樣空氣量，再決定所選儀器的單位時間采樣（yàng）量和采樣時間。
（6）采樣儀器對所監測（cè）工藝或環境的影響
這也是選（xuǎn）擇檢測儀（yí）器和檢測方法時必須考慮的問題。例如某些微（wēi）生物采樣器噪聲較大，如果用於手術中（zhōng）的微生物采樣，就要顧忌其是否影響、幹擾醫護人員的正常操（cāo）作。
2、采樣計（jì）劃的製定
采樣計（jì）劃首先應該明確所檢測、監測的生物汙染控（kòng）製區的潔淨度、生物汙染控製水平，這些指標是依據工作人員的安全、保護工（gōng）藝和保證產品的質量，以及保障環（huán）境的需要來確定的。這些指標通常由業主、使用單位提出。
（1）采（cǎi）樣計劃
采樣計劃必須以正式（shì）文件的形式確定下來，以作為生物汙染檢測工作所依據的（de）證明文件。此文件經業主、承包（bāo）商或檢測單位共同認可，並符合國內、的相關規範。這個有關采樣計劃的證明文件，對生物汙染數據的準確（què）評價與（yǔ）解釋是*的。采樣計劃中應明確檢測時該區域所處的狀態。一般情況下（xià），生物汙染檢測（cè）是在動態條件下，甚至（zhì）選擇在該區域活動頻繁的時間段。當然，靜態條（tiáo）件下的檢測也是需要的，它（tā）能對潔淨室的設計與效能提供有用的（de）信息，並可（kě）作（zuò）為運行中比對的原始資料。采樣（yàng）計劃文件中（zhōng）應就檢測狀況（kuàng）予以明確規定。
（2）采樣點（diǎn）的選擇與（yǔ）數量
除均布測點外，危險區（qū）域通常宜增點測點。例如生物潔淨手術室的手術床周圍，一般都會額外增設測點。
1）沉降菌
我國國家標（biāo）準GB/T 16293-1996《醫藥工（gōng）業潔淨室（區）沉降菌的測試（shì）方法》（2006版的《醫（yī）藥工業潔淨廠房設（shè）計規範》仍遵循此測（cè）試方法）中關於（yú）測點的規定如（rú）下表：
沉降法的少采樣點數目

注：表中的麵積，對於單（dān）向流潔淨室，是指送（sòng）風麵積；對於非（fēi）單向流潔淨室是指房間的（de）麵積
表中的（de）潔淨度級別，依原有習慣按美國聯邦標準209的分級（jí）劃（huá）分，表中（zhōng）的英製100級相當ISO 5級，10000級（jí）相（xiàng）當於（yú）ISO 7級，100000級相當於ISO 8級。
表中所規定（dìng）的沉降（jiàng）菌測點數與住房和（hé）城鄉建設部行業標（biāo）準JGJ 71-90 《潔淨（jìng）室施工及驗收規範（fàn）》所規定的空氣中懸浮微粒采樣的低采樣點數（shù）是*一致的。
工作區采樣點的位置，一般略（luè）高於（yú）工作麵，即離地0.8～1.5m。
在關鍵設備或關鍵活動範圍處可增加采樣點。
根據ISO 14644-1的規定，空氣（qì）中懸浮微粒測（cè）定的采樣點（diǎn）數較之大（dà）為削減，至於沉降菌的測（cè）點數（shù）是否參照現行標（biāo）準執行，尚有待研究決定。尤其是在動態條件下（xià）按國內現行標準進行沉降菌的監測，表中所列測點數對（duì）於麵積較大的高級別生物潔淨室，在實施時困難（nán）是較大的。
2）浮遊菌
我國（guó）國家標準GB/T 16294-1996《醫藥工業潔淨室（區）浮遊（yóu）菌（jun1）的測試方法》中（2006版的《醫藥工業潔淨廠房設（shè）計規範（fàn）》仍（réng）遵循此測試方法（fǎ））關於測點的規定如下表所列，表中（zhōng）區（qū）別驗證與監測兩種不同情（qíng）況給出了不同的采樣（yàng）點數。
浮遊菌測試的少采樣點數目

注（zhù）：1、表中（zhōng）的麵積，對於（yú）100級的單向流潔淨室，包括層（céng）流工作台，指的是送風口表麵積；對於（yú）10000級、100000級的非單向流潔淨室，指的是（shì）房間麵積。
    2、日常監測的（de）采樣點數目由（yóu）生產工藝的關鍵操作點（diǎn）來（lái）確定。
浮遊菌采（cǎi）樣測點的位（wèi）置一般離地麵0.8～1.5m。送風口測點（diǎn）位置一（yī）般距出風麵0.3m左右，測點位置也宜離（lí）開汙染較集中的回風口1m以上（shàng）。對（duì）於關鍵設（shè）備與關鍵工（gōng）作活動範圍（wéi）處（chù）宜增加測點數。
3）采樣點均布方法
對於均布采樣點（diǎn）的布置（zhì）方法，GB/T 16293-1996和GB/T 16294-1996還提供（gòng）了一些測點布置圖供參考：

國家標（biāo）準GB 50333-2002《醫院潔淨手術部建築技術規範》關於不同級別手術室監（jiān）測時的（de）測點數與位置如下（xià）表所列（liè）。無論（lùn）是塵粒數、浮遊菌、沉降菌采樣，均按下表執行。

手術室麵積一般在20～60m²範圍，通常是高級別的麵積較（jiào）大，低級別的麵積稍小。以單位麵積的測點數推算，上表所（suǒ）列采樣點數與國內現行（háng）的其它標準基本一致。
3、采樣量（liàng）的要求
采樣量（liàng）偏小可能提供不了具有代表性的結果，過大的采樣量又將增加工作（zuò）量，降低工作效率，國標GB/T 16293、GB/T16294分別作出了一些規（guī）定，可供參考。
（1）沉降菌
GB/T16294-1996對於沉降菌的培養皿數有（yǒu）如下規定：在滿足所規定的少測點數的同時，還宜（yí）滿足所規定（dìng）的少培養皿數，如下表所列：
國家標準GB 50333-2002《醫（yī）院潔淨手術部建築技術規範》對沉（chén）降菌（jun1）測試少培（péi）養皿數規定如下表所（suǒ）列：

（2）浮遊菌（jun1）
GB/T 16293-1996關於浮遊菌檢測時，根據日常監測與環（huán）境驗證的不同情況，給出了每次小采樣量的規定值，如下表所列（liè）：

國家標準GB 50333-2002《醫院潔淨手（shǒu）術部建築技術規範》對懸（xuán）浮微粒采樣（yàng）量的規定是：每次采樣的小采（cǎi）樣量100級（jí）區域為5.66L，以下各級區域為（wéi）2.83L。關於浮遊菌的（de）測試，GB 50333-2002的規定如（rú）下表所列：

4、檢測（cè）與監測的頻率
生物汙染（rǎn）受控環境的檢測（cè）與潔淨室的檢測相類似，在（zài）建設與常規運（yùn）行過程中應有以（yǐ）下的（de）檢測計劃。
（1）竣工驗收檢測；
（2）生物潔淨（jìng）室綜合性能（néng）評價；
（3）定期監測。
此外，發生以下情況時需要（yào）額外安排檢測（cè）或調整監測頻率，其中有（yǒu）些情（qíng）況（kuàng）也是生物汙染受控環境所*的（de）。
（1）生物汙染受控環境連續超過報警值或動作值，需立即進行幹預，以（yǐ）查明原因並采取糾正措施。
（2）生物潔淨室長期停運之後，在正（zhèng）式啟（qǐ）用之前需進（jìn）行（háng）檢測。
（3）在危險區檢測到傳染媒介時。
（4）對通風空調淨化係統進行重（chóng）大維護工作之後。
（5）對生物潔淨環境產生影響的工藝變更之後。
（6）改變清潔或消毒（dú）方法之後。
（7）可能會造成生物汙染的意外事故發生之後。
5、樣品處理與培養
這也是生物汙染受控環境有別於工業潔淨（jìng）室（ICR）檢測的主要方麵。截止目前，生物汙染（rǎn）受控環境普（pǔ）遍采用的檢測方法，其采樣都要經過一（yī）定時間的（de）培養才（cái）能得出結果（guǒ）。正因為如此，對生物潔淨（jìng）室（shì）的采樣要格外細心，避免（miǎn）差錯，通常要注意（yì）以下幾個方（fāng）麵：
（1）樣品標（biāo）識
1）每個采樣的樣品都應包含以下信息，以便在獲得（dé）培養數據後，為正確分析檢測結果提供可靠的依據（jù）。
2）采集（jí）日（rì）期和時間。
3）采集當時進（jìn）行的（de）活動以及（jí）偏離采樣計劃之處。
4）采樣人。
5）培養基類（lèi）型。
（2）樣品處理方法
樣（yàng）品從各采樣點收集後，要運送到（dào）集中培養處，在（zài）運輸或處理過程中不（bú）應影響所采集到的（de）微生物的活性與數量，以下方麵應予以注意：
1）運輸和儲存的條件是（shì）否適宜，進（jìn）入正式培養前的時（shí）間（jiān）是否偏長（zhǎng）。
2）中和介（jiè）質和滲透稀釋液的正確使用。
（3）樣品培養
培養基是按照所選定的微（wēi）生物種（zhǒng）類，並（bìng）根據采樣環境、采樣方法及所使用的設備來確定的，不（bú）同微生物及培養基的（de）培養條件有所不同。
為了保證采樣與培養的結果有效，培養基的品質十分關鍵。除了其組分（fèn）、性能的可靠外，培養基容器外表麵的（de）潔淨度十分重要，通常需要二（èr）層或三層包裝。如有可（kě）能，在選擇培養基的培養溫度（dù）和時間時，要（yào）考慮對預期采集到的微生物（wù）有利的生長條（tiáo）件。